Идентификация левзеи и качественный анализ препаратов

Собранные осенью, очищенные от остатков надземных частей и от земли, промытые и высушенные корневища с корнями многолетнего травянистого дикорастущего или культивируемого растения рапонтикума сафлоровидного (син. маралий корень, левзея сафлоровидная) - Rhaponticum carthamoides (Willd.) Iljin (syn. Leuzea carthamoides (Willd.) DC., сем. Астровых – Asteraceae.

Корневище цельное или разрезанное, иногда с остатками стеблей длиной до 1 см, цилиндрическое или многоглавое разветвленное, снаружи неравномерно морщинистое, в изломе неровное, с многочисленными тонкими ветвящимися придаточными корнями. Корни упругие, мелкобороздчатые. Толщина корневищ до 3 см толщины, длина корней – до 36 см. Цвет корневищ и корней снаружи от буро-коричневого до почти черного, в изломе – бледно желтый; часто встречаются корни с мелкими участками, лишенными коры. Запах слабый, своеобразный. Вкус слегка сладковатый, смолистый.

Измельченное сырье. Кусочки сырья различной формы, проходящие сквозь сито по ГОСТ 214-83 с отверстиями диаметром 7 мм. Цвет желтовато-коричневый. Запах слабый, своеобразный. Вкус слегка сладковатый, смолистый.

Корни диаметром 2-3 мм кипятят в % % растворе натра едкого в течение 5 мин. Готовят давленный препарат, в котором видны многочисленные элементы ксилемы: сосуды, трахеиды, древесные волокна, сердцевинные лучи. Сосуды пористые и сетчатые, состоящие из очень коротких члеников, обычно слегка смещенных по отношению друг к другу; реже в центре корня встречаются спиральные и лестничные сосуды. Трахеиды пористые, большей частью веретеновидные, с очень толстой оболочкой и узкой полостью.

Древесные волокна короткие, веретеновидные, резко сужающиеся на концах, часто раздвоенные или искривленные, с многочисленными, преимущественно косыми порами. Клетки сердцевинных лучей четырехугольные, слегка или сильно вытянутые, имеют утолщенные пористые оболочки. В меньшем количестве в препарате видны элементы коры, среди которых наиболее характерны секреторные каналы, состоящие из довольно угловатых клеток с красновато-бурым содержимым. Клетки коровой паренхимы округло-угловатые. Имеющийся в клетках паренхимы инулин виден в препарате, приготовленном из соскоба сухой коры в глицерине.

К сухому порошку, полученному путем соскабливания поперечного излома корня или корневища, прибавляют 2-3 капли раствора йода; не должно быть синего окрашивания (отсутствие крахмала).

Сухой порошок от прибавления 1-2 капель 20% спиртового раствора а-нафтола и 1 капли концентрированной серной кислоты должен окрашиваться в красновато-фиолетовый цвет; при замене а-нафтола резорцином – в красный цвет, тимолом – в розовато-малиновый (инулин).

Цельное сырье. Экстрактивных веществ, извлекаемых 70% спиртом, не менее 12%; влажность не более 13%; золы общей не более 9%; остатков стеблей, в том числе отделенных при анализе, не более 2 %; органической примеси не более 1%; минеральной примеси не более 4%.

Измельченное сырье. Экстрактивных веществ, извлекаемых 70% спиртом, не менее 12%; влажность не более 13%; золы общей не более 9%; частиц, не проходящих сквозь сито по ГОСТ 214-83 с отверстиями диаметром 7 мм, не более 10%; частиц, проходящих сквозь сито по ТУ 14-4-1374-86 с отверстиями размером 0,5 мм, не более 20%; органической примеси не более 1%; минеральной примеси не более 4%.

Примечание. Содержание экдистена в сырье, предназначенном для получения субстанции, должно быть не менее 0,1 % и должно определяться только заводом-изготовителем.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито по ГОСТ 214-83 с отверстиями 1 мм. Около 15 (с погрешностью 0,01 г) измельченного сырья помещают в пакет из фильтровальной бумаги и опускают в экстрактор аппарата Сокслет, рабочий объем которого около 150 мл. Экстрагируют 180-200 мл метилового спирта в течение 7 ч (25-30 сливов). Экстракт концентрируют на ротационном испарителе при температуре 40 градусов С до объема около 5 мл, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора метиловым спиртом до метки и тщательно перемешивают.

Стеклянную пластинку размером 20 х 20 см с закрепленным слоем сорбента делят на 5 полос. На стартовые линии первой и второй наносят по 0,15 мл полученного извлечения в виде полосы 2 см, на третью и четвертую полосы по 0,15 мл (252 мкг) раствора Государственного стандартного образца (ГСО) экдистена, пятая полоса служит контролем при спектрофотометрировании.

Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 20 мин, затем помещают в камеру со смесью растворителей хлороформ – метиловый спирт – ацетон (6 : 2 : 1) (время насыщения камеры 30 мин) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры и сушат на воздухе в течение 1 ч.

Затем одну из полос с испытуемым раствором и одну из полос с раствором ГСО экдистена опрыскивают раствором ванилина в концентрированной серной кислоте. На необработанной части пластинки отмечают зоны экдистена на уровне проявленных пятен и количественно переносят их и зону контрольной полосы в колбы вместимостью 100 мл с притертыми пробками, прибавляют по 15 мл метилового спирта и элюируют экдистен с сорбента при непрерывном встряхивании в течение 4 ч. Элюат отфильтровывают через стеклянный фильтр ПОР-16 при слабом вакууме (остаточное давление 0,04 МПа) и определяют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 242 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют элюат с зоны контрольной полосы. Содержание экдистена в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:
Х = mo x 7 x 0,15 x D x 25 x V x 100 x 100 / 25 x 25 x Do m x 0,15 x Vo x (100-W) = mo x D x 2800 / m x Do x (100-W)
где D – оптическая плотность элюата испытуемого раствора;
Do – оптическая плотность элюата раствора ГСО экдистена;
m – масса сырая в граммах;
mo – масса ГСО экдистена в граммах;
V – объем элюата испытуемого раствора в миллилитрах;
Vo – объем элюата раствора ГСО экдистена в миллилитрах;
W – потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Примечание. 1. Приготовление ГСО экдистена. Около 0,15 г (точная навеска) экдистена – стандартного образца (ВФЧ 42-1713-87) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 20 мл 95 % спирта и перемешивают. Затем доводят объем раствора 95 % спиртом до метки и перемешивают. 7 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят тем же 95 % спиртом до метки и перемешивают. Раствор хранят в темном месте в колбе с притертой пробкой. Срок годности 1 мес.

2. Приготовление сорбента. В качестве сорбента применяют смесь окиси алюминия по ТУ 6-09-3916-75 просеянной через сито № 61 (150-200 меш) или окиси алюминия по Брокману П нейтральной (ВНР силикагеля марки Л 5/40 м, пригодного для приготовления пластинок без дополнительной очистки или КСК, измельченного и отмытого от солей железа, как описано ниже.

2 кг белого гранулированного силикагеля марки КСК по ГОСТ 3956-76 Е, измельченного на шаровой мельнице в течение 15 ч, просеянного через сито № 61 (150-200 меш), помещают в бутыль вместимостью 10 л, приливают 3 л хлористоводородной кислоты и равное количество воды, тщательно взбалтывают и оставляют на 15-20 ч.

Для промывки силикагеля в бутылку приливают около 8 л воды, взбалтывают и через 7 ч осветленную жидкость сливают. Промывание силикагеля таким образом повторяют до 10 раз, до отрицательной реакции на реакции на хлориды (ГФ XI, вып. 1, стр. 165). Отмытый силикагель сушат на воздухе в течение 15-20 ч, а затем в сушильном шкафу при температуре 120 градусов С в течение 12 ч.

3. Приготовление хроматографической пластинки.9 г силикагеля и 3 г окиси алюминия по ТУ 6-09-3916-75 или 5 г силикагеля и 7,5 г окиси алюминия по Брокману П нейтральной (ВНР) растирают в ступке с 0,4 г кальция сульфата по ТУ 6-09-5316-86, постепенно прибавляют 25 мл воды, тщательно перемешивают и ровным слоем наносят на стеклянную пластинку размером 20 х 20 см, которую оставляют на горизонтальной поверхности до высушивания, затем активируют нагреванием в сушильном шкафу при 120 градусов С в течение 1 ч и хранят в эксикаторе.

В соответствии с ГОСТ 6077-80. Цельное сырье упаковывают в тюки из ткани по ГОСТ 19298-73, не более 40 кг нетто; измельченное сырье – в мешки по ГОСТ 18225-72 или ГОСТ 19317-73, не более 25 кг нетто.

В соответствии с ГОСТ 6077-80 и ГОСТ 14192-77.
В соответствии с ГОСТ 6077-80.
2 года

Для получения жидкого экстракта и экдистена.
Примечание. Реактивы и растворы, приведенные в настоящей фармакопейной статье и методики определения числовых показателей описаны в соответствующих разделах Государственной фармакопеи СССР X и XI изд., вып. I.